ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。
1.洗板
①保證洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙（選擇潔凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
②合理安排，或多用幾臺洗板機。
2.讀板
應保證酶標板清潔，在整個操作過程中保證酶標板不觸摸次氯酸；盡可能完結ELISA檢測標準自動化，有用前進檢測質量。
3.加樣
①標本為血清：將血液先天然寄存1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：有必要運用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后有必要當即倒置采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
②加樣后及時放入孵箱。
③加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
④如果選用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
⑤標本較多時，請分批操作。
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