ELISA試劑盒檢測(cè)方法的原理

目前，酶聯(lián)免疫（ELISA試劑盒）檢測(cè)技術(shù)廣泛用于免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)等。由于其具有靈敏度高、試劑穩(wěn)定、設(shè)備簡(jiǎn)單、操作安全等優(yōu)點(diǎn)，近幾年也將其應(yīng)用到食品領(lǐng)域中來(lái)檢測(cè)某些食品中的生理活性物質(zhì)。

酶聯(lián)免疫吸附法（elisa試劑盒檢測(cè)方法）原理：

原理：ELISA可用于測(cè)定抗體，也可用于檢測(cè)杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。3種必要的試劑： ①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）； ②酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）； ③酶作用的底物（顯色劑）。

ELISA過(guò)程包括：抗原吸附在固相載體上，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為包被，加待測(cè)抗體, 再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體，生成抗原--待測(cè)抗體--酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物，再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體的量。

根據(jù)檢測(cè)目的和操作步驟不同，有以下三種類(lèi)型的常用方法：

1.間接法 
此法是測(cè)定抗體zui常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗體）與之結(jié)合。洗滌后，加人酶標(biāo)抗球蛋白抗體（酶標(biāo)抗抗體）和底物進(jìn)行測(cè)定。

2.雙抗體夾心法 
此法常用于測(cè)定抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加人待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗原）與之結(jié)合。溫育后洗滌，加人酶標(biāo)板中。

3.競(jìng)爭(zhēng)法 
此法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體。加入待測(cè)抗原和一定量的酶標(biāo)已知抗原，使二者竟?fàn)幣c固相抗體結(jié)合；經(jīng)過(guò)洗滌分離，zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。